UNA TRIPLE MUTACIÓN EN LA SECUENCIA DE LA ENZIMA BLANCO DEL GLIFOSATO ES RESPONSABLE DE LA RESISTENCIA DE UNA POBLACIÓN DE YUYO COLORADO (Amaranthus hybridus) DE LA PROVINCIA DE CÓRDOBA

Valeria Perotti, Alvaro Larran, Valeria Palmieri, Daniel Tuesca y Hugo Permingeat
AGROBIOTEC-FCA, FCA-UNR, Campo Experimental Villarino, S2125ZAA Zavalla.
E-mail: hperming@unr.edu.ar

Históricamente, el yuyo colorado (Amaranthus hybridus, anteriormente conocida como A. quitensis) ha sido una de las malezas más problemáticas en los cultivos estivales de nuestro país, no sólo por su fisiología (extraordinaria velocidad de crecimiento y reproducción) sino también por la aparición de subpoblaciones con resistencia múltiple a herbicidas. El hallazgo de una subpoblación resistente a inhibidores ALS y a glifosato en la localidad de Canals (pcia. de Córdoba) nos propició el material de estudio para cumplir con un objetivo: dilucidar las bases moleculares de la resistencia, en este caso, a glifosato.

Luego de confirmar la resistencia agronómica mediante curvas de dosis-respuesta (donde LD50 y GR50 mostraron ser superiores a 17 Kg ha-1), se procedió a la determinación de la acumulación de shikimato en discos de hoja de plantas individuales, obteniéndose valores en un rango de 4 a 7 ng µl-1 para las plantas sensibles (S) y cercanos a 0 para las plantas resistentes (R), dando indicios de un mecanismo asociado al sitio de acción.

Posteriormente, se llevó a cabo la secuenciación de la región génica que contiene a la Prolina 106 del gen epsps, posición cuya mutación es responsable de la resistencia a glifosato en diferentes malezas. Se secuenciaron los productos de PCR de 12 plantas R y 2 plantas S, encontrándose la recientemente reportada doble mutación “TIPS” (correspondiente a las sustituciones T102I y P106S) en 8 plantas R, confirmando un mecanismo asociado al sitio de acción. Curiosamente, se halló una tercera mutación en la posición 103 de la secuencia aminoacídica (tomando como referencia la secuencia de EPSPS de maíz). Dicha mutación produce la sustitución de un residuo de alanina, normalmente encontrado en la proteína salvaje, por uno de valina. Esta sustitución representa un hallazgo muy interesante desde el punto de vista de su potencial aplicación biotecnológica, dado que podría estar implicada en otorgar niveles de resistencia a glifosato inusualmente altos, tal como los observados en la maleza en estudio. Futuros ensayos son necesarios para confirmar esta hipótesis.

Finalmente, se realizó la determinación comparativa del número de copias del gen epsps en las mismas plantas de ambas subpoblaciones, utilizando el gen als como referencia. Así, la subpoblación de Canals presentó un incremento promedio de 3,6 veces comparada con la subpoblación S. Por lo tanto, el presente trabajo permitió elucidar por primera vez el mecanismo de resistencia a glifosato en la especie A. hybridus.

Palabras clave: yuyo colorado, EPSPS, triple mutación, Amaranthus quitensis.

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